在pcr實(shí)驗(yàn)中，陽性對照是一個(gè)已知含有目標(biāo)DNA序列的樣本，它可以用來驗(yàn)證整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的正確性，包括樣本的提取、反轉(zhuǎn)錄和pcr擴(kuò)增步驟。如果陽性對照能夠產(chǎn)生預(yù)期的pcr產(chǎn)物，那么說明實(shí)驗(yàn)條件是適宜的，實(shí)驗(yàn)操作是正確的。

　　反轉(zhuǎn)錄pcr試劑盒通常包含了所有必需的組分，如反轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液以及特定的引物。而陽性對照則需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體要求來選擇或者制備。陽性對照可以是商業(yè)購買的質(zhì)粒DNA，也可以是實(shí)驗(yàn)室保存的細(xì)胞或病毒提取物，其關(guān)鍵在于它們含有的目標(biāo)序列應(yīng)當(dāng)與實(shí)驗(yàn)樣品中的預(yù)期序列相同或高度相似。

　　在設(shè)置陽性對照時(shí)要注意以下幾點(diǎn)：

　　1.濃度匹配：陽性對照的DNA濃度應(yīng)當(dāng)與實(shí)際樣品中的DNA濃度相近，以確保其擴(kuò)增效率相似。

　　2.防止污染：陽性對照應(yīng)單獨(dú)準(zhǔn)備和使用，避免交叉污染導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果失真。

　　3.批次一致性：如果實(shí)驗(yàn)需要分多批次進(jìn)行，應(yīng)確保每個(gè)批次都有相同的陽性對照，以保持結(jié)果的一致性。

　　4.操作規(guī)范：在操作過程中，應(yīng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，確保陽性對照的正確添加和使用。

　　在進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄pcr實(shí)驗(yàn)時(shí)，陽性對照的使用流程通常如下：

　　1.準(zhǔn)備陽性對照：取出適量的陽性對照，解凍并混勻。

　　2.添加陽性對照：在設(shè)置實(shí)驗(yàn)時(shí)，將陽性對照添加到反應(yīng)體系中，通常每個(gè)反應(yīng)體系都會添加一個(gè)陽性對照。

　　3.進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和pcr：按照試劑盒的說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和pcr擴(kuò)增。

　　4.分析結(jié)果：通過凝膠電泳或其他檢測方法分析pcr產(chǎn)物，確認(rèn)陽性對照是否產(chǎn)生了預(yù)期的擴(kuò)增帶。

　　5.結(jié)果解釋：如果陽性對照成功擴(kuò)增，而實(shí)驗(yàn)樣品沒有擴(kuò)增，說明樣品中可能不存在目標(biāo)序列；如果陽性對照也未能擴(kuò)增，則可能是實(shí)驗(yàn)操作或試劑問題。

　　陽性對照在反轉(zhuǎn)錄pcr實(shí)驗(yàn)中扮演著質(zhì)量控制的角色。正確的陽性對照不僅能夠驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的有效性，還能夠幫助我們排除假陰性結(jié)果，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。因此，在進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄pcr實(shí)驗(yàn)時(shí)，選擇合適的陽性對照并正確使用，是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵所在。